Testmethodik (FAVN Test)

Bemerkungen zur Methodik der serologischen Untersuchung (FAVN-Test).

Die Untersuchung erfolgt mit einem Test, der hochspezifisch die neutralisierenden Antikörper gegen Tollwut erfasst. Als neutralisierende Antikörper werden diejenigen Antikörper klassifiziert, die in einem Infektions-Assy die Infektion der Zellen durch das Tollwutvirus verhindern (= die [Infektiosität der] Tollwutviren neutralisieren). Für einen Virusneutralisationstest benötigt man a). virusempfängliche Zellen sowie b). infektiöses Tollwutvirus.

Die mit einem ELISA gemessenen Antikörper haben demgegenüber nicht notwendigerweise eine virus-neutralisierende Funktion, weshalb das ELISA-Testverfahren prinzipbedingt nicht für die Bestimmung einer Immunität gegenüber dem Tollwutvirus geeignet ist.

Ablauf des Virus-Neutralisationstests: zunächst wird die Serumprobe über mehrere Stufen verdünnt. Diese Verdünnungen werden in einzelne Reagenzröhrchen gegeben und mit einer bestimmten Menge an infektiösem Tollwutvirus gemischt. Dieses Virus ist in der Lage, Zellen in Organismen oder Kulturen zu infizieren. Wenn entsprechende Antikörper im Serum vorhanden sind, binden diese am Virus und das Tollwutvirus verliert seine Infektiosität. Das Virus kann keine Zellen mehr infizieren - es ist also neutralisiert. Anschließend wird das Virus-Serumgemisch auf Zellkulturen gebracht, wo die ggf. noch nicht neutralisierten Viren die Zellen infizieren können. Diesen Vorgang kann man nach 48 Stunden mit monoklonalen Antikörpern sichtbar machen, die ihrerseits mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert sind. Die letzte Serumverdünnung, in der noch eine infizierte Zelle im Fluoreszenzmikroskop nachgewiesen wird, bestimmt den im Befund ausgewiesenen Titerwert. Parallel wird in jedem Test ein international geeichtes Standardserum des World Organisation for Animal Health (WOAH) [vormals: Internationales Seuchenamt, Paris (OIE)] mitgeführt. Durch einen mathematischen Bezug wird dann der IU-Wert des Patientenserums berechnet (IU = internationale Einheiten]. Das ist der Wert, der Ihnen mitgeteilt wird.

Der FAVN Test ist ein Virus-Neutralisations-Test, der vom Institut AFFSA (CNEVA) in Malzeville, Frankreich, entwickelt wurde und heute eine Standardmethode der WOAH ist. Regelmäßig müssen alle Laboratorien an einer Prüfung teilnehmen, um zu zeigen, dass sie alle die Kriterien der exakten Titerbestimmung erfüllen. Die Überprüfung wird vom European Union Reference Laboratory (EURL) for rabies in Malzeville durchgeführt. Das EUROVIR Hygiene-Labor hat bisher an allen Prüfungen erfolgreich teilgenommen und ist deshalb seit 2001 von der EU für diesen Test anerkannt.